有机磷农药是一类用于防治农林病虫害的有机磷酸酯类或硫代磷酸酯类化合物。由于有机磷农药杀虫性较好，能有效增加农产品的产量，因此被广泛应用于果蔬种植中。近年来有机磷农药逐渐取代有机氯农药，被大量使用甚至出现滥用现象，部分农业废水排放至地下，严重威胁生态环境。含有农药残留的果蔬被食用后，农药会在人体内部积累，不能被有效分解，当农药超过一定量，可能出现畸形甚至死亡，因此建立一种快速、准确测定果蔬中多种有机磷农药残留的方法具有十分重要的意义。

  目前农药残留现场快速检测技术发展迅速，但快速检测方法存在重现性差，定量不准确，易出现假阳性等一系列问题，因而不能被广泛应用。传统的有机磷农药残留分析多采用气相色谱法和气相色谱 – 质谱联用法。气相色谱法分析多个农药需要分组，对于色谱峰重合的农药需要用双柱进行定性，工作效率低，抗干扰能力差。气相色谱 – 质谱联用法分析多个农药时分析时间长，重现性差，检测效率低，氧化乐果和乙酰甲胺磷容易吸附在衬管中的玻璃毛上，使得灵敏度降低；去掉玻璃毛，虽然提高了灵敏度，但样品中的不挥发组分容易污染色谱柱，给仪器的维护和清洁带来不便。随着科学技术的发展，高效、快速、经济、定量准确的检测技术成为未来发展趋势。目前液相色谱 – 质谱联用法测定有机磷残留的相关报道较少，且同时测定的农药数目较少。笔者采用固相萃取净化样品，结合超高效液相色谱仪，配备三重四极杆液质联用系统进行采集分离，采用动态多反应离子监测模式分析 26 种有机磷农药残留，减少样品基质的干扰。该法测定样品种类广，分析速度快，适用于大批量样品的快速检测，定性、定量准确，灵敏度高，且分析过程无需加热，测定易分解农药时优于气相色谱 – 质谱联用法。

1 试验部分

1.1 主要仪器与试剂

  超 高 效 液 相 色 谱 – 三 重 四 极 杆 质 谱 联 用 仪：1290–6495 型，美国安捷伦科技有限公司；

  匀浆机：Silent crusher M 型，德国海道尔夫集团；超纯水机：Milli-Q [**]dvantage [**]10 型，美国密理博公司；

  旋涡混合器：VORTEX 1 型，德国艾卡公司；

  氮吹仪：N-EV[**]P^TM 112 型，美国 Organomation[**]ssociates 公司；

  离心机：Universal 320R 型，德国 Hettich 公司；真空固相萃取装置：CNW24 位，北京盈祥科技有限公司；

  Bond Elut NH2 SPE 柱：500 mg／(6 mL)，美 国安捷伦科技有限公司；

  氯化钠：分析纯；

  二氯甲烷、乙腈、甲醇：色谱纯；

  甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、敌百虫、乐果、敌敌畏、杀螟硫磷、甲拌磷亚砜、特丁硫磷亚砜、甲拌磷砜、杀扑磷、亚胺硫磷、灭线磷、特丁硫磷砜、马拉硫磷、三唑磷、倍硫磷、对硫磷、二嗪磷、甲基异柳磷、蝇毒磷、甲拌磷、治螟磷、伏杀硫磷、丙溴磷、毒死蜱标准品：质量浓度均为 1 000 μg／mL，天津农业部环境保护科研监测所。

1.2 溶液的配制

  取 26 种有机磷农药标准品各 800 μL，分别置于 10 mL 容量瓶中，用丙酮定容至标线，于 –18℃冰箱内避光保存。试验时用干净空白基质溶液配制标准工作溶液，现用现配。

1.3 仪器工作条件

1.3.1 色谱条件

  色 谱 柱：Eclipse Plus C18 色 谱 柱 (50 mm×3.0 mm，1.8 μm，美 国 安 捷 伦 科 技 有 限 公 司 ) ；柱 温：40 ℃；进 样 体 积：2 μL ；流 动 相：[**] 为 5 mmol／L乙酸铵 +0.10% 甲酸水溶液，B 为乙腈，流量为 0.30 mL／min，梯度洗脱程序见表 1 ；后运行时间：1 min。

1.3.2 质谱条件

离子源：[**]JS ESI ；鞘气温度 350℃；鞘气流量：L／min ；扫描类型：Dynamic MRM ；扫描模式：正离子模式；干燥气温度：200℃；干燥气流量：14L／min ；雾化气压力：276 kPa(40 psi)。

1.4 样品前处理

  准确称取 (10.00±0.10) g 样品于 50.0 mL 塑料离心管中，加入 20.0 mL 乙腈，匀浆提取 1 min，加入4 g 氯化钠，涡旋振荡 3 min，以 5 000 r／min 离心 5 min，移取 10.0 mL 上清液于玻璃离心管中，氮吹蒸发至近干，残渣用 2.0 mL 甲醇 – 二氯甲烷 (1∶9) 溶解。用 5.0 mL 甲醇 – 二氯甲烷 (1∶9) 预淋洗 SPE 柱，倒入上述待净化溶液，用 15.0 mL 离心管收集洗脱液，再用 15 mL 甲醇 – 二氯甲烷 (1∶9) 分 3 次洗离心管后过柱，氮吹蒸发至近干。最后用 5.0 mL 乙腈 –水 (1∶1) 溶解残渣，混匀，过 0.22 μm 滤膜，待测。

2 结果与讨论

2.1 流动相的优化

  以乙腈为流动相 B，分别采用 5 mmol／L 乙酸铵（0.10% 甲酸水溶液）、水作为流动相 [**]，结果表明，用乙腈和水作为流动相时，峰形和分离度均较差；用乙腈和乙酸铵作为流动相时，能够得到较好的峰形，同时乙酸铵中加入甲酸能够提高目标物的响应值。

  进一步考察乙酸铵溶液中甲酸的体积分数分别为 0.00%，0.05%，0.10%，0.15%，0.20%，0.25% 时对色谱峰的影响，结果表明，乙腈和 5 mmol／L 乙酸铵（0.10% 甲 酸 水 溶 液）为 最 佳 流 动 相，13 min 内 26种有机磷农药被全部检出，峰形和分离度较好。

2.2 质谱条件的优化

  选择响应值高的子离子作为定量离子，响应次之的作为定性离子，同时对各离子的碰撞能量进行优化，优化后各农药质谱参数见表 2。

2.3 样品前处理的优化

  分别考察了多功能振荡器、超声波、匀浆机混合方式对样品中有机磷农药回收率的影响，结果表明，采用多功能振荡器和超声波混合样品，各农药的回收率较匀浆机略低，而匀浆机能使样品混合均匀，显著提高了样品中各农药的回收率，因此采用匀浆机混合样品。进一步考察 Supelclean LC–NH₂ 柱、[**]gilent Bond Elut Carbon／NH₂ 柱 和 [**]gilent Bond Elut NH₂ SPE 柱对 26 种农药回收率的影响，结果表明 [**]gilent Bond Elut Carbon／NH₂ 柱对大部分农药有吸附，回收率较低，而 Supelclean LC–NH₂ 柱和[**]gilent Bond Elut NH₂ SPE 柱对 26 种农药回收率差别不大，但 Supelclean LC–NH₂ 柱流量小，延长试验时间，故采用 [**]gilent Bond Elut NH₂ SPE 柱净化。

2.4 基质效应

由于果蔬基质复杂，提取液中的杂质对目标化合物产生较大影响，因此以苹果为例，通过苹果基质和溶剂标准工作曲线斜率比值考察基质效应。

结果表明，敌敌畏、二嗪磷基质效应小于 80，为基质抑制效应，敌百虫、亚胺硫磷基质效应大于 120，为基质增强效应，其余22种农药的基质效应在80～120 之间，基质效应可忽略。因此实际样品的测定采用基质标准溶液。

2.5 线性方程及检出限

  采用干净苹果基质配制系列标准工作溶液，消除基质效应的影响，以各农药质量浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标绘制标准工作曲线。以3 倍信噪比（S／N）计 算 各 农 药 在 基 质 中 的 检 出限。苹果中 26 种有机磷农药的线性范围、线性方程、相关系数、检出限见表 3。由表 3 可知，26 种有机磷农药在一定质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好，相关系数均大于 0.995，方法检出限为0.176 2～1.355 0 μg／kg。

2.6 回收率试验与精密度试验

用空白番茄、白菜、包菜、苹果作基质，分别添加10，50，100 μg／kg 标准溶液，按 1.4 方法处理，在 1.3仪器工作条件下平行测定 6 次，结果见表 4。由表 4可知，测定结果的相对标准偏差为 0.2%～12.7%，样品加标回收率为 60.1%～116.5%，表明该法精密度和准确度较高，满足分析要求。

2.7 样品分析

  按所建方法对 20 种果蔬共 100 个样品进行测定，其中 6 个样品被检出氧化乐果、毒死蜱、乐果、灭线磷、丙溴磷，其余样品均未检测出有机磷农药残留，表明该方法适用于大批量样品的测定。

3 结语

  建立了固相萃取 – 超高效液相色谱 – 串联质谱法测定果蔬中 26 种有机磷农药的残留量。该法缩短了检测时间，提高了工作效率，测定结果准确、可靠，适用于果蔬中多种有机磷农药残留的同时测定。