药品是特殊的商品，必需保证其质量，用药的平安与有效。应用微生物学技术办法监控药品的有效性及平安性是药品微生物学检验质量保证的根本任务。生物检验法是目前微生物检测的首选法，但此法操作程序多，步骤冗杂，任何疏漏或非规范化的操作条件，均可招致测定结果的误差。为了使检验结果反映药品的污染情况，在详细检验操作中还需求有一系列的技术措施保证，以便客观地反映污染水平，进步检验结果的精确性，消弭或尽可能降低实验过程中可能发作的误差和错误结果。下面就形成检验误差的缘由及控制办法分述如下：

1、培育基的影响

培育基是培育检测细菌的营养制品，其质量的好坏、稳定与否，对检验结果有极为重要的影响。多数厂家消费的枯燥培育基普通质量较稳定，须按运用阐明条件配制和寄存，在规则的效期内运用，对初购的培育基应停止质量检查。对自配培育基应测定其有效性及灵活度。在改换配方成分时应停止质量检查。

1.1 已知茵对照实验

各种专注和特殊用处的培育基，特别是生化鉴别实验培育基，在初次运用前，均须用已知的菌株作对照，测定各种生化及其它反响的质量效果，以保证培育基各种鉴别反响的灵活度和精确性。

1.2酸碱度测定

各种细菌皆有其适合生长繁衍的pH值范围，而且有些细菌请求较严，因而培育基的pH极为重要。配制过程中测试pH时，必需以冷却后的温度为准，否则颜色反响不准；各种培育基所请求的最终pH，是制废品灭菌冷却后的实践pH。因冷热的温差较大，其pH各异。另外，调理pH时应逐步加碱，避免过量，否则如再加盐酸矫正，必将会增加培育基内的含盐量，可降低培育基的运用效果，影响细菌生长。用氢氧化钠调理的弱碱性培育基，高压灭菌前pH可比最终pH约高0.2左右，灭菌后根本适宜。如用碳酸氢钠调理pH的培育基，灭菌前的酸碱度应稍低于最终请求的pH值，普通灭菌后稍增高或不变。

1.3培育基的制备

制备后的培育基应及时灭菌，不应放置，防止细菌繁衍。要取平均的供试液注皿，如取上清液或沉淀物对实验结果必然有影响。注皿时培育基应在(45±1)℃，高于45℃时易形成细菌受损或致死，低于45℃时易凝固，影响混匀，因而运用前可用水浴保温效果较好。从供试品稀释、注平皿、倾注培育基，全部操作应在1 h内完成，防止由于时间过长，招致细菌细胞繁衍或死亡。培育基平皿要及时与皿内供试液振摇平均，避免细菌堆叠生长或成片，影响计数。

2、设备的影响

对各种器械及设备均应有定期检定与维修记载，以保证其正常运用。各种培育箱除定期计量认证外，于培育箱内置放最高、最低温度计，每天察看温度动摇范围。玻璃仪器、容量仪器须校验，玻璃器械均应洗濯洁净，不残留酸碱及抑菌物质。

3、计数误差

3.1

在停止菌落计数时，应认真察看。菌落生长小而密集，最易发作计数误差，要认真判别。勿漏计细小的、琼脂内战争皿边缘生长的菌落，同时应留意细菌菌落与供试品中颗粒、沉淀物、气泡等的鉴别。必要时用放大镜或低倍显微镜直接察看或挑取可疑物涂片镜检。如仍难区别，可延长培育时间5～7 d，细菌菌落常会生长增大而容易鉴别。

3.2

供试品稀释液中常含有不溶性原料、辅料，培育基注皿后也可能产生沉淀物，经过培育后有时构成数量很多且难与菌落相鉴别的有形物，为了有利于菌落计数，可在操作时将适合稀释级的稀释液多增加注皿1～2个，注皿后不经培育而放置于冰箱(勿冻结)中，在计数菌落时作为对照。或用0.001％TTC营养琼脂注皿，经培育后可将细菌菌落与其他有形物区别开来。（小编注：依据15版中国药典，营养琼脂已不运用；TTC已不运用）

3.3

供试品如为微生物制剂，应将有效微生物菌落扫除，不可计在菌数内。扫除的办法需按该制剂微生物种类而定，并须察看菌落特征及染色形态。例如，乳酸菌素制剂中含量测定与细菌总数测定分别采用不同办法加以区别。

3.4

菌落生长呈蔓延趋向者，细菌点计需在24 h，霉菌点计需在48 h作初步点计(点计霉菌菌落时，动作宜轻，勿重复翻转平板或形成震动，使早期构成的孢子散落在平板的其它部位，又萌发新的霉菌菌落，招致计数误差。

3.5

由于培育中一些菌落蔓延生长而影响另一些菌落生长，以至掩盖了一些菌落，干扰计数。避免菌落蔓延办法如下：

(1)加0.001％1Tc营养琼脂在倾注培育基前，在每1000 ml营养琼脂内参加灭菌1％TIC溶液1 ml(最终浓度为0.001％，混匀后倾注平皿)。

(2)开盖枯燥将已凝固的琼脂平板开盖，倒置斜放于净化工作台上，开机1～2 h后合盖，再放培育箱中。

(3)换陶瓦盖将已凝固的琼脂平板盖换上新近经干热灭菌后的陶瓦盖。

3.6

当高稀释级均匀菌落数大于或等于低稀释级均匀菌落数时，应以培育基稀释法重新测定。

4、无菌室方面形成的误差

无菌室的微生物评价是对环境监控不可短少的指标，它触及到干净情况，灭菌消毒情况等的有效性，并能有效检验操作者对控制环境中微生物情况足够形成影响的操作行为。

4.1 定期检查无菌室的空气能否契合规则

无菌室常用臭氧消毒器产生的臭氧气体，对空气停止有效消毒，杀菌效果不受物体遮挡影响，消毒无死角。臭氧在常温下自行逐步合成为氧，半衰期为20一30 min，合成过程中产生非常生动具有激烈氧化作用的单氧原子、氧化离子团，能在霎时杀灭细菌、病毒、霉菌等微生物，是公认的快速、高效、广谱、平安的杀菌剂。为了确保环境的无菌情况，操作前应对操作环境的无菌情况停止监测，最常用的办法为菌落计算法：将经过预培育的普通琼脂培育基的无菌平皿3个，分别放置工作面的左、中、右处，开盖，暴露30 min后，置30～35℃培育48 h，平皿内的均匀菌落数少于1个。如超越，应立刻中止运用，需彻底消毒灭菌。

4.2严厉无菌操作

正确而纯熟地控制无菌技术是精确完成检验工序，得到牢靠结论的前提。无菌室内仅寄存最必需的检验用具，坚持固定位置，不随意移交。在干净室中最关键的污染源是人员，污染率取决于无菌操作区操作者的操作活动。操作时应在近火焰区操作，而且在一切操作中均不应大幅度或快速动作，以免搅动空气中尘埃微粒。

5.被测药物性质的影响

5.1供试液的制备

按供试品的理化特性与生物学特性可采取适合的办法制成供试液。制备供试液时，力图平均分散。由于测定中一个细菌可能繁衍成一个菌落，而一群也可能只构成一个菌落，测定时与匀质方式、条件关系极为亲密，分散充沛时，菌落生长数多，反之菌落数就少。

5.2供试品的抑菌性

很多药物有抑菌或杀菌的作用。检验结果的精确性，主要取决于供试品自身在实验条件下能否抑止被检微生物的生长繁衍。有抑菌作用的检验结果是不精确的，应扫除其抗菌作用。对含抑菌成分的供试品来说，供试品按常规检查法，参加规则量的对照菌，不能检出时，该供试液须按以下办法之一或两种以上办法结合处置后，依法检查。同时做阳性和阴性对照。常用的办法有：稀释法、中和法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法。（小编注：2015版中国药典已删除离心沉淀集菌法）

6、抽样

抽验局部样品推断整批药品的微生物质量，是药品微生物限度检验的根本任务。药品微生物检验不同于化学药品的含量测定，由于污染于药品中的微生物具有特殊性：

第一，药典中以活的微生物作为检验对象。

第二，散布的不平均性。在一个批号内产品有的被污染，有的不兹污桨，分方万匀；在被污染的局部中，有的数量极多，有的较少，品种上能够复杂或较单一。

这种不平均性源于污染原的复杂性，有原辅料污染、工艺污染、空间污染和操作人员污染等等构成污染量的几差别，构成不均态。再者，微生物具有族团性，族团大小、严密水平是可遗传的，族团的分散性差别极大，该特性无疑强化了不平均性。正由于以上这些特性，抽样办法、抽样数量、抽样次数等抽样情况很大水平上决议着检验的结果。遵照随机准绳的概率抽样能够保证抽选出代表性较高的样本，使样品具有代表性，保证样本推论总体的牢靠性。