2结果与讨论

2.1定性分析

2.1.1黄芪薄层鉴别

   分别称取1.1中3个批号的精芪参固本胶囊内容物4.0g，加入乙酸乙酯50mL，加热回流1h，放冷，滤过，将滤液浓缩至2mL，作为样品溶液。按照精芪参固本胶囊制备工艺制备不含黄芪的样品，取适量按同法制成阴性对照溶液。采用黄芪甲苷对照品配制成质量浓度为1.0mg／mL的黄芪甲苷对照品溶液。按照《中国药典》2015版四部0502薄层色谱法，分别吸取上述5种溶液各5μL，展开剂为正己烷–甲醇（16∶1），展开，取出，晾干，显色方式是喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。样品色谱在对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，而阴性对照在此位置则没有斑点，方法专属性强，可作为本品中黄芪的鉴别，见图1。

   图1中由左到右依次为阴性对照、20180606样品、20180608样品、20180610样品、黄芪甲苷对照品。

2.1.2人参薄层鉴别

   分别取1.1中3个批号的精芪参固本胶囊内容物2.0g，加三氯甲烷50mL，加热回流1h，滤过，弃去三氯甲烷溶液，待药渣挥干溶剂，加入甲醇20mL，回流1h，滤过，将滤液蒸干，在残渣中加入30mL水，加热溶解，加入水饱和的正丁醇提取2次，每次20mL，合并正丁醇溶液，再用正丁醇饱水30mL洗涤，将正丁醇蒸干，残渣中加甲醇1mL溶解，作为供示品溶液。不含人参的阴性对照品溶液制备方法同供试品溶液制备方法，仅处方中不含人参。将人参皂苷Rg，Rb1制成1mg／mL的甲醇溶液。按照《中国药典》2015版四部0502薄层色谱法，分别吸取上述5种溶液各5μL，点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷–甲醇–水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，显色方式是喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，见图2。

   图2中由左到右依次为对照品（Rg和Rb1）、20180606样品、20180608样品、20180610样品、阴性对照。

2.2定量分析

2.2.1提取条件选择

   分别以甲醇、乙醇、50%乙醇为提取溶剂，对精芪参固本胶囊进行提取试验，测定样品中芍药苷的含量，计算提取率，提取率计算结果依次为98.5%，94%，96%，可见甲醇的提取率最高。以甲醇为溶剂，提取时间分别选择5，10，15，20，25min进行试验，结果见表1。由表1可知，随着时间的增加提取率随之增高，20min以后提取率趋于稳定，因此选择提取时间为20min。

2.2.2流动相的选择

   以不同比例的乙腈–0.4%磷酸为流动相，体积比分别设定为12∶88，15∶85，20∶80，25∶75进行试验，芍药苷分离度分别为1.415，1.528，1.735，1.503，当体积比为20∶80时，色谱峰形对称，分离度大于1.5，符合测试要求，综合考虑选择乙腈–0.4%磷酸（20∶80）为流动相。在流动相中加入适量磷酸，可以使峰形不拖尾。在上述色谱条件下，阴性样品（不含芍药的其它几味药材按照处方制备工艺制成）、芍药苷对照品、样品色谱图见图3～图5。

2.3线性方程及检出限

   在1.3仪器工作条件下对1.2中系列标准工作溶液进行测定，以芍药苷的质量浓度（X）为横坐标，色谱峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准工作曲线，得线性方程为Y=79462940X+18487，线性相关系数r为0.9998，线性范围为9.236～55.416μg／mL。

   连续测定空白溶液（甲醇）11次，以3倍信噪比对应的溶液浓度平均值作为方法检出限，得方法检出限为180ng／g。

2.4精密度试验

   取20180606号精芪参固本胶囊20粒内容物，按1.4方法进行样品处理，在1.3仪器工作条件下连续进样6次，测定结果见表2。

2.5稳定性试验

   取20180606号精芪参固本胶囊20粒内容物，按1.4方法进行样品处理，分别放置0，4，8，12，24h，在1.3仪器工作条件下测定芍药苷的色谱峰面积，结果见表3。

   由表3可知，芍药苷色谱峰面积相对标准偏差为1.37%（n=5），表明样品溶液在24h内基本稳定，方法稳定性良好。

2.6加标回收试验

   取20180606号样品适量，分别加入芍药苷对照品适量，用甲醇溶解，超声20min，溶液用甲醇定容至100mL，过滤，取滤液，在1.3仪器工作条件下测定，结果见表4。由表4可知，平均加标回收率为98.87%，说明方法的准确度较高。

2.7样品测定及含量限度的确定

   从市场上购买6批白芍药材，分别制成相应6批制剂，用所建方法对不同批次精芪参固本胶囊中芍药苷的含量进行测定，结果见表5。

   由表5可知，6批不同规格药材中芍药苷的含量为2.26%～2.96%（22.6～29.6mg／g），含量差异较大。2015年版《中国药典》一部葛根项下含量规定芍药苷的含量不得少于1.6%（16mg／g），由此计算每粒含生药0.1200g，芍药苷的理论含量最低不少于1.92mg／粒，以上转移率在58.5～63.3%，制成制剂后最低应为1.12～1.21mg／粒。结合工业化大生产的特点，本标准将芍药苷的限量暂定为不少于1.0mg／粒。

3结语

   利用薄层色谱法鉴定精芪参固本胶囊制剂中黄芪和人参，用液相色谱法测定精芪参固本胶囊中芍药苷的含量，采用乙腈–0.4%的磷酸（20∶80）作为流动相，所得色谱峰形对称，分离度符合要求。该方法具有专属性强，精密度高，重复性好的特点，可为精芪参固本胶囊的质量控制提供理论依据。