桑白皮为桑科植物桑 (Morus alba L.) 的干燥根皮，早在《神农本草经》中就有记载，历史悠久，主产于浙江、江苏、安徽等地，其中安徽亳州产桑白皮优于江浙两地，因其产量大、色白、皮厚、柔韧、质量好而称为“亳桑皮”，且享誉全国。近年来对桑白皮的研究多集中在化学成分和药理药效方面，对炮制工艺的研究很少，目前尚无关于亳桑皮品质与质量特征的报道，因此对亳桑皮炮制工艺进行系统研究，对于维护亳桑皮道地药材地位与提升其价值具有重要的作用与意义。

  目前桑白皮的干燥方法有直接晒干、阴干或烘干，方法多样，质量参差不齐。历代对桑白皮的炮制方法有酒制、蜜酒制、米浆水和豆制、鼓制及制炭等多种方法。《中国药典》中记载蜜桑白皮，炮制方法过于简略，没有量化标准。为了明确不同干燥方法和蜜炙方法对亳桑皮质量的影响，笔者分别在60℃烘干、晒干、阴干、霉变后 60℃烘干 4 种不同方法下对亳桑皮质量进行探究，以及对药材与蜜的比例、闷润时间、炒制火候及炒制时间等 4 个因素进行考察，通过 4 因素 3 水平的正交试验法，以亳桑皮中的主要活性成分之一桑根酮 C 为指标进行含量测定比较，以期为亳桑皮药材加工规范化和炮制规范化提供有效的依据。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

  可控硅恒温水浴锅：HHS 型，上海锦屏仪器仪表有限公司；

  高效液相色谱仪：[**]gilent 1260 型，美国安捷伦科技公司；

紫外检测器：V[**]D 型，美国安捷伦科技公司；

TR[**]NSSONIC 超声仪：T 700／H 型，德国艾尔玛公司；

  电子分析天平：[**]UW 220 型，精度为 0.1 mg，日本岛津仪器公司；

  电热恒温鼓风干燥机：DHG–9070[**] 型，金华安琪烘箱设备有限公司；

打粉机：XFB–500 型，浙江中诚制药机械厂；桑根酮 C 对照品：纯度大于 99%，批号为 JOT–11145，苏州菲德儿生物技术有限公司；

蜂蜜：洋槐蜜，上海冠生园 ( 集团 ) 有限公司；亳桑皮药材：2017 年 3 月采挖于亳州十九里的一颗桑树；

甲醇：色谱纯，天津市大茂化学试剂厂；

实验用水为纯净水，550 mL／瓶，杭州娃哈哈有限公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：Inertsil C18 色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm，日本岛津仪器公司 ) ；柱温：30℃；流动相：甲醇 – 水 (75∶25) ；流量：1.0 mL／min ；检测波长：280 nm ；进样体积：10 μL。

1.3 亳桑皮的炮制工艺

  采挖后的亳桑皮药材按照 2015 版《药典》中的方法进行处理。

  （1）净制、干燥。去除非用药部位、泥土等，用流动自来水冲洗干净，刮去黄棕色粗皮，纵向剖开，剥取根皮，切丝，于 60℃烘干。

  （2）蜜 炙。 采 用 适 量 开 水 将 炼 蜜 稀 释 后，置于亳桑皮丝中，搅拌均匀，闷透，然后置于温度为120～150℃的锅内，用中火炒制 15 min 直至不粘手，取出，放凉后，粉碎过孔内径为 (250±9.9) μm 的筛（四号筛），备用。

1.4 溶液的制备

  桑根酮 C 对照品溶液：0.146 mg／mL，精密称取 14.601 mg 桑根酮 C 对照品于 100 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至标线，备用。

  供试品溶液：亳桑皮样品按批粉碎，过孔内径为 (250±9.9) μm 的筛，贴好标签；分别精密称取

2.0 g 各批次药材粉末于具塞锥形瓶中，精密加入 20 mL 甲醇，称量，于 80℃回流提取 1 h，放冷，再称量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，用0.45 μm 的滤膜过滤，取续滤液，即得。

1.5 正交试验设计

  选择药材与蜜比例（[**]）、闷润时间（B）、炒制火候（C）和炒制时间（D）4 种因素，每个因素设计 3个水平。以桑根酮 C 的含量为评价指标，进行 4 因素 3 水平的 L9(34) 正交设计。正交试验因素水平见表 1。

2 结果与讨论

2.1 干燥方法优选

  亳桑皮药材经采挖后立即洗净，刮去栓皮，随机分成 4 组，然后分别在 60℃烘干、晒干、阴干、霉变后 60℃烘干 4 种条件下处理，随后再将处理后的样品分别均分成 4 组，依次编号为 1#~16#。按 1.3方法制备供试品溶液，在 1.2 色谱条件下测定亳桑皮中桑根酮 C 的含量，结果见表 2。由表 2 可知，于60℃条件下烘干的亳桑皮中桑根酮 C 含量最高，因此确定亳桑皮干燥方法为 60℃烘干。

2.2 蜜炙亳桑皮正交试验设计

采用正交试验对蜜与水的比例(1∶1.0，1∶1.5，1∶2.0) 和闷润时间等因素进行了探究，确定蜜炙桑白皮的最佳炮制方法。通过专业炮制专家得知，蜜与水的比例对药材质量研究无现实意义，而药典中通常是按照药材与蜜的比例为 4∶1对药材进行炮制，故选取药材与蜜的比例分别为3∶1，4∶1，5∶1 作为正交试验的 3 个水平，L9(34) 设计正交试验因素水平见表 1。

  按照 1.5 方法进行正交试验，结果见表 3。由表 3 可知，影响桑根酮 C 提取效率因素的主次顺序为 C ＞ D ＞ B ＞ [**]，即炒制火候＞炒制时间＞闷润时间＞药材与蜜比例。亳桑皮炮制的最优组合为[**]2B1C2D3，即药材与蜜的比例为 4∶1，闷润 20 min，于 120～150℃温度下用中火炒制 15 min。

 正交试验方差分析结果见表 4。由表 4 可知，因素 [**] 和 B 对试验结果均无显著影响，因素 D 具有一定影响，而因素 C 对亳桑皮的质量具有显著性影响。表明了炒制火候的重要性，进一步确定了影响因素的主次顺序。

2.3 专属性试验

  精密吸取桑根酮 C 对照品溶液和供试品溶液各 10 μL，分别注入高效液相色谱仪进行测定，色谱图见图 1。由图 1 可知，在与桑根酮 C 对照品色谱相应位置上，供试品溶液与其它组分分离度良好，专属性强。

2.4 线性关系与检出限

分别精密吸取 5，10，15，20，25 μL 质量浓度为0.146 mg／mL 的对照品溶液，依次进样，在 1.2 色谱条件下进行测定，记录其峰面积，以对照品溶液的进样体积（X ）为横坐标，峰面积（Y ）为纵坐标绘制标准工作曲线，线性回归方程为 Y=1 794.3X–1 608.9，线性相关系数为 0.999 9。试验结果表明，桑根酮 C含量在 0.73～3.65 μg 范围内与色谱峰面积存在良好的线性关系。精密吸取 1.25 mL 质量浓度为 0.146mg／mL 的对照品溶液，逐步稀释，在 1.2 色谱条件下连续进样并测定 6 次，记录峰面积，当信噪比为3∶1 时得方法的检出限为 0.001 8 mg／mL。

2.5 重复性试验

  精密吸取质量浓度为 0.146 mg／mL 的对照品溶液 10 μL，重复进样 6 次，在 1.2 色谱条件下进行测定，记录峰面积，结果见表 5。由表 5 可知，桑根酮 C 测定结果的相对标准偏差为 1.5%，表明该法重现性良好。

2.6 精密度试验

  取同一批样品 6 份，分别按 1.3 方法制备供试品溶液，在 1.2 色谱条件下进行测定，测定结果见表6。由表 6 可知，测定结果的相对标准偏差为 1.47%，表明该法精密度良好。

2.7 稳定性试验

  精密吸取同一供试品溶液，在 1.2 色谱条件下，分别间隔 0，2，4，6，8，10 h 进样 10 μL，测定峰面积，结果见表 7。由表 7 可知，测定结果的相对标准偏差为 1.47%，表明样品在 10 h 内稳定性良好。

2.8 加标回收试验

  精 密 称 取 9 份 桑 根 酮 C 含 量 为 0.171 1% 的样品，置于 9 个具塞锥形瓶中，分别精密加入适量0.146 mg／mL 的桑根酮 C 对照品溶液，水浴挥干甲醇，按照 1.3 方法制备供试品溶液，在 1.2 色谱条件下进行测定，测定结果见表 8。由表 8 可知，样品加标回收率为 96.75%~100.03%，表明该方法具有较高的准确度。

3 结语

  优化了亳桑皮的炮制工艺。采用 4 因素 3 水平的正交试验，分析各因素影响作用的大小和显著性，从而确定了亳桑皮的炮制工艺。以高效液相法测定亳桑皮中桑根酮 C 的含量为检测指标，结果准确、可靠。该工艺可为亳桑皮的规范化生产提供科学理论依据，并为进一步探讨亳桑皮的炮制，制定蜜炙亳桑皮的质量标准提供参考。