灰霉病是露地、保护地作物常见且比较难防治 的一种真菌性病害，目前用于防治灰霉病的农药主要是氟啶虫酰胺和嘧菌环胺。由于氟啶虫酰胺和嘧菌环胺为新型杀菌剂，其残留问题并未像有机磷、有机氯及菊酯类农药那样引起重视，国内外关于蔬菜中氟啶虫酰胺、嘧菌环胺残留量测定的文献报导较少。近年来，不合理施用农药对人类的食品安全、自然环境以及生态群落带来的负面影响愈发显著，因此加强对蔬菜中氟啶虫酰胺和嘧菌环胺的监测具有重要意义。

  甘蓝类蔬菜中氟啶虫酰胺和嘧菌环胺的检测方法主要有气相色谱法、液相色谱法、液相色谱 – 质谱法和气相色谱 – 质谱法。气相色谱法、液相色谱法灵敏度差，且假阳性率较高，需双柱定性，检测效率低；液相色谱 – 质谱法仪器价格较高，试剂用量较大，不利于推广；气相色谱 – 质谱法检测灵敏度高，仪器成本较低，适于推广。因此笔者开发一种用固相萃取富集、净化甘蓝类蔬菜中的氟啶虫酰胺和嘧菌环胺，气相色谱 – 串联质谱定性定量的检测方法。该方法灵敏度高，样品处理简单，测定结果准确，可对甘蓝类蔬菜中氟啶虫酰胺和嘧菌环胺的监测提供数据支持。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

  气相色谱 – 质谱联用仪：QP–2020 型，日本岛津科技有限公司；

  氮吹仪：YGC–36 型，中国成都雅源有限公司；电子天平：BS[**]–224 型，感量为 0.1 mg，德国赛多利斯有限公司；

  台式高速冷冻离心机：H205 R 型，北京盈祥科技有限公司；

  Carb／NH2 固相萃取柱：500 mg／(6 mL)，天津博纳艾杰尔科技有限公司；

  C₁₈ 柱：500 mg／(6 mL)，北京盈祥科技有限公司；

  Florisil 柱：500 mg／(6 mL)，北京盈祥科技有限公司；

  ENVI–Carb 活性炭固相萃取柱：500 mg／(6 mL)，北京盈祥科技有限公司；

  氟啶虫酰胺：100 μg/mL，编号为 158062–67–0德国 [**]ccuStandard 公司；

  嘧菌环胺标准溶液：100μg／mL，编号为SB05-317-2016，北京盈祥科技有限公司；

  丙酮、甲苯、乙腈：色谱纯，美国 Fisher 科技有限公司；

  氯化钠：分析纯，北京盈祥科技有限公司；

1.2 仪器工作条件

1.2.1 色谱

  色谱柱：HP–5MS 石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm，美国安捷伦科技有限公司 ) ；柱流量：1.2 mL／min ；进样口温度：250℃；检测器温度：280℃；载气：高纯氦气，纯度为 99.999% ；进样方式：不分流；进样体积：1.0 μL。升温程序：初始温度为 60℃，保持 2 min，以 23℃／min 升温至 180℃，保 持 6 min ；再 以 15 ℃ ／min 升 温 至 270 ℃，保 持10 min。

1.2.2 质谱

离子源：EI 源；离子源温度：200℃；接口温度：250℃；溶剂延迟时间：1.5 min ；监测方式：多反应监测 (MRM) 模式，两种农药的 MRM 参数见表 1。

1.3 溶液配制

  混合标准储备液：10 µg／mL，精密移取嘧菌环胺、氟啶虫酰胺标准溶液各 1 mL 于 10 mL 容量瓶中，用丙酮稀释至标线，摇匀。

  系列混合标准工作溶液：移取适量混合标准储备液，用丙酮稀释成质量浓度分别为 0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 μg／mL 的系列混合标准工作溶液，精密移取上述系列混合标准工作溶液各 1 mL 于已吹至近干的空白样品基质中，即得。

1.4 样品处理

取新鲜的甘蓝样品，切碎，用均质机匀浆后装入洁净的容器中，密封并置于 –18℃冷藏箱中冷冻保 存。 称 取 20.00 g 已 均 质 好 的 甘 蓝 样 品 于 100mL 离心管中，加入 5～10 g 氯化钠，40 mL 乙腈，于10 000 r／min 转速下匀浆提取 2 min，然后以 8 000r／min 离心 3 min，取上清液 25 mL 用氮气吹至近干。以 ENVI–Carb 固相萃取柱为净化柱，使用前用5 mL 乙腈 – 甲苯 (3∶1) 溶液活化，然后用 15 mL 乙腈∶甲苯 (3∶1) 溶液分 3 次清洗上述样品，收集清洗液过柱富集，收集洗脱液，用氮气吹至近干，残渣用丙酮定容至 1 mL，混匀，待测。

2 结果与讨论

2.1 质谱检测模式及参数的确定

  甘蓝类蔬菜样品基质复杂，样品浓度低时，用SC[**]N 模式无法找到目标离子。采用 SC[**]N 模式对混合标准储备液进行全扫描，得到嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的总离子流图和前体离子。初步设定前体离子的扫描方法，然后对嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的前体离子进行扫描 (Production scan 模式 )，根据得到的离子对选择响应高的一组作为定量离子对，另选 2 对作为定性离子对，并对该扫描方法进行碰撞时间、碰撞电压范围、碰撞电压间隔、离子比率等条件进行优化。根据优化结果建立嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的多反应监测 (MRM) 分析方法。两种两种农药的最佳质谱参数。

2.2 萃取溶剂用量的选择

  农药残留分析中，乙腈能溶解大部分农药，且对色素和油脂的提取量较少，因此乙腈可作为农药提取的首选溶剂。于空白甘蓝样品中加入 5.0 µg／mL 的混合标准溶液，分别考察 30，40，50 mL乙腈作为萃取溶剂时样品中嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的回收率，试验结果见表 2。由表 2 可知，用 30 mL乙腈提取时，两种农药的回收率均较低；用 40，50 mL 乙腈提取时，两种农药的回收率相差不大。考虑到经济性、环保性等因素，选择 40 mL 乙腈作为萃取溶剂。

2.3 固相萃取柱的选择

  农药残留净化处理时常用 Florisil 柱、C₁₈ 柱、NH₂ 柱和ENVI–Carb 活性炭固相萃取小柱。分别选择以上 4 种类型的柱子进行比较，结果表明，Florisil 柱具有良好的杂质去除能力，但对极性较强的农残吸附较大，导致回收率偏低；C₁₈ 柱主要去除蔬果中的脂肪，对色素净化效果不佳；NH₂ 柱综合去杂质能力强，但对脂溶性色素去除不完全；ENVI–Carb 活性炭固相萃取小柱适用于去除水果、蔬菜中的色素 ( 如叶绿素和类胡萝卜素 ) 及固醇类化合物，其净化效果最好，且嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的回收率最高。故选择 ENVI–Carb 柱净化样品。

2.4 线性方程及检出限

  在 1.2 仪器工作条件下，待仪器稳定 30 min 后，对系列混合标准工作溶液进行测定，以嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的质量浓度 (x) 为横坐标，以色谱峰面积 (y) 为纵坐标，绘制标准工作曲线。以 3 倍信噪比 (S／N=3) 对应的质量浓度作为方法检出限。两种农药的保留时间见表 1，典型标准色谱图如图 1所示，两种农药线性范围、线性方程、相关系数及检出限见表 3。

  由表 3 可知，两种农药的质量浓度在 0.05～2.0μg／mL 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数均大于 0.998，方法检出限分别为 0.005，0.008 mg／kg，表明该方法灵敏度较高。

2.5 加标回收与精密度试验

  准确称取不含嘧菌环胺和氟啶虫酰胺的甘蓝样品 25.00 g 于 100 mL 离心管中，加入一定量的混合标准储备溶液，配制成终点质量浓度分别为 0.1，0.5，1.0 mg／kg 的 3 种浓度水平的加标样品溶液，按照 1.4 方法对样品进行处理，在 1.2 仪器工作条件下，待仪器系统稳定后，对每个浓度水平的样品连续测定 6 次，结果见表 4。

  由表 4 可知，3 种浓度水平加标样品的平均回收率为 87.4%～97.3%，测定结果的相对标准偏差为1.3%～3.2%(n=6)。说明该方法的准确度及精密度度较高，满足分析测试要求。

2.6 重复性测试

  在空白甘蓝样品中加入质量浓度为 0.5 mg／kg的嘧菌环胺和氟啶虫酰胺混合标准液，按 1.4 方法平行处理 6 份样品，待仪器系统稳定后，在 1.3 仪器工作条件下进行测定，结果见表 5。由表 5 可知，嘧菌环胺和氟啶虫酰胺重复性测定结果的相对标准偏差分别为 2.8%，3.1%。

3 结语

  利用固相萃取技术对甘蓝类蔬菜样品进行萃取、净化处理，建立了一种气相色谱 – 串联质谱法测定嘧菌环胺和氟啶虫酰胺农药残留的检测方法。分别对质谱的监测模式和方法参数进行了优化，对萃取溶剂用量进行了讨论；比较了多种固相萃取柱对嘧菌环胺和氟啶虫酰胺测定结果的影响；对所建立的方法进行了线性、检出限、加标回收、精密度、重复性等考察，结果表明，该方法样品处理简单、检出限低、测定结果准确，适用于甘蓝类蔬菜中嘧菌环胺和氟啶虫酰胺类农药的测定。