(羟甲基)咪唑烷基脲(DU)是其中的常用成分。目前我国许多化妆品生产厂家使用的杰美系列防腐剂，主要成分就是咪唑烷基脲及其衍生物，其用量(以质量分数计)一般为0.12%～0.16%，文献报道在668份化妆品样品中，使用双(羟甲基)咪唑烷基脲防腐剂的有70份，占比10.48%。该类防腐剂具有广谱抑菌作用，通过缓慢释放甲醛来抑制微生物的生长，从而达到防腐的目的。我国《化妆品安全技术规范》(2015版)中双(羟甲基)咪唑烷基脲的最大允许用量为0.5%。长期使用含此类防腐剂的化妆品容易导致过敏反应。因此建立双(羟甲基)咪唑烷基脲的定量分析方法具有重要意义。

双(羟甲基)咪唑烷基脲在溶液状态下极不稳定，在化妆品中可降解为3～4个化合物，并且降解情况与化妆品存放时间、基质组成等有关，因此直接测定化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲含量具有一定难度，目前国内仅胡艾希等建立了采用乙酰丙酮衍生后用荧光光谱测定的方法。笔者对该化合物降解过程及甲醛释放情况进行了研究，并在此基础上建立了高效液相色谱测定化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲含量的分析方法。以双(羟甲基)咪唑烷基脲为对照品，在优化条件下使其释放甲醛并达到稳定状态，建立标准曲线以外标法定量，方法检出限及回收率均满足要求，可用于化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲的含量测定。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

   高效液相色谱仪：[**]gilent1260型，美国安捷伦科技有限公司；

   漩涡混合器：MS3型，德国IK[**]公司；

   离心机：5810R型，德国艾本德公司；

   电子分析天平：SQP型，感量为0.1mg，德国赛多利斯集团；

   双（羟甲基）咪唑烷基脲：纯度为95%，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；

   甲醇、乙腈：色谱纯，德国默克公司；

   氢氧化钠、浓盐酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

   2，4-二硝基苯肼：分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司；

   醋酸铵：分析纯，德国默克公司；

   水基、乳液、油基类化妆品样品：均为市售；实验用水为超纯水。

1.2溶液配制

   氢氧化钠溶液：2mol／L，称取8g氢氧化钠，加入适量水溶解，然后转移至100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。

   乙腈水溶液：90%，量取180mL乙腈于锥形瓶中，加入20mL水，摇匀。

   盐酸溶液：2mol／L，吸取16.7mL浓盐酸于100mL量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。

   2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取0.2g2，4-二硝基苯肼于锥形瓶中，加入40mL浓盐酸，超声溶解，加入60mL水，摇匀。

   乙酸铵溶液：pH4.0，称取0.77g乙酸铵于烧杯中，加入500mL水搅拌均匀，以乙酸调至溶液pH值至4.0。

   双(羟甲基)咪唑烷基脲标准储备液：1mg／mL，称取100mg双(羟甲基)咪唑烷基脲于100mL容量瓶中，加入乙酸铵溶液溶解并定容至标线，摇匀。

   双(羟甲基)咪唑烷基脲系列标准工作溶液：用乙腈水溶液将双(羟甲基)咪唑烷基脲标准储备溶液分别逐级稀释成100，50，20，10，5，2，1μg／mL的系列标准工作溶液。

1.3仪器工作条件

   色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)；流动相：甲醇–水(体积比为60∶40)；流量：1.0mL／min；柱温：25℃；进样体积：10μL；检测波长：355nm。

1.4样品处理

   精密称取0.2g(精确至0.0001g)样品，置于具塞带刻度的试管中，加入乙腈水溶液至10mL，涡旋2min，混匀，以5000r／min转速离心5min。精密吸取1.0mL上清液于10mL离心管中，加入1mL氢氧化钠溶液，调溶液pH值至9，涡旋混匀，放置5min，加入1mL盐酸溶液，涡旋混匀，以5000r／min转速离心5min，精密吸取1.0mL上清液于10mL离心管中，加入0.4mL2，4-二硝基苯肼盐酸溶液，涡旋1min，静置2min，待测。

2结果与讨论

2.1双(羟甲基)咪唑烷基脲降解过程

   文献研究表明，在降解过程中1mol双(羟甲基)咪唑烷基脲可释放3mol甲醛。降解过程受浓度、时间、pH值等条件影响，在碱性条件下该化合物降解速度快，随溶液浓度的提高，降解稳定时间延长。为考察该化合物最终降解稳定条件，分别对50，100，500μg／mL3种不同浓度的双(羟甲基)咪唑烷基脲溶液在pH4，pH6，pH9的缓冲溶液中的降解过程进行研究。结果表明，在浓度为100μg／mL，pH9的双(羟甲基)咪唑烷基脲溶液中很快达到降解稳定；相同条件下浓度为500μg／mL的双(羟甲基)咪唑烷基脲溶液12h后仍有30%未完全降解；在pH4及pH6条件下，3种浓度的双(羟甲基)咪唑烷基脲溶液在放置12h后均未完全降解。因此在样品处理过程中，加入氢氧化钠调节溶液pH值至9，使甲醛释放稳定后测定。

2.2衍生溶液选择

   分别对乙酰丙酮、2，4-二硝基苯肼两种常用的甲醛衍生试剂进行考察，结果表明，乙酰丙酮作为衍生试剂需在40℃水浴中放置30min，操作复杂，对结果的重复性影响较大；2，4-二硝基苯肼作为衍生试剂，操作简便快速，结果重复性好。紫外检出器在355nm下测定的2，4-二硝基苯肼衍生后样品溶液的色谱图如图1所示。由图1可以看出，该条件下衍生试剂用量合适，衍生过程完全，色谱峰分离良好无干扰。因此选择2，4-二硝基苯肼为衍生试剂。

2.3线性方程及检出限

   在1.3仪器工作条件下，对以双(羟甲基)咪唑烷基脲系列标准工作溶液进样测定，以双(羟甲基)咪唑烷基脲的质量浓度(x)为横坐标，以色谱峰面积(y)为纵坐标，绘制标准工作曲线，计算得线性方程为y=96.213x+30.770，线性相关系数为0.9998，线性范围为1～100μg／mL。以3倍信噪比(S／N=3)时的试样浓度作为检出限，本方法检出限为0.0005%。

2.4加标回收与精密度试验

   分别选取水基、乳液、油基3个空白样品，每个样品添加3，6，30μg／mL3个不同浓度水平，按1.4方法处理样品，在1.3仪器工作条件下对每个浓度水平重复测定6次，结果见表1。由表1可知，样品加标回收率为92.1%～108.2%，测定结果的相对标准偏差为0.18%～1.83%(n=6)。表明该方法的精密度和准确度良好，满足分析要求。

2.5实际样品测定

   用所建立的方法，对实验室自制阳性样品及市售阳性样品进行测定，结果见表2。由表2可知，自制样品的测定值与标示值基本一致，相对误差为6.67%～16.67%；市售阳性样品均检出双(羟甲基)咪唑烷基脲，含量范围为0.20%～0.35%，与配方标示一致，均符合《化妆品安全技术规范》(2015版)相关规定。

3 结语

   建立了高效液相色谱测定化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲含量的分析方法。该方法以化合物降解释放的甲醛为目标，间接测定其含量，结果重复性好，回收率及检出限均满足要求，可用于化妆品日常检测中双(羟甲基)咪唑烷基脲含量的测定，填补了化妆品中该类物质的检测空白，为化妆品安全质量控制提供技术支持。