2结果与讨论

2.1样品溶媒的选择

   分别选择水、甲醇、70%乙醇和流动相［十二烷基硫酸钠–乙腈–甲醇(2∶6∶2)］作为样品溶媒进行试验，结果发现，不同的溶媒对凝胶消毒剂中度米芬溶出结果影响不同，影响由大到小依次为流动相、甲醇、水、70%乙醇，这与基质溶解度及酸碱性有很大的关系，综合考虑选择以流动相作为样品溶液溶媒，这样既能使度米芬完全溶出又能使基线平稳。

2.2流动相的选择

   度米芬为阳离子型药物，有文献报道采用C18色谱柱进行含量测定，以0.012mol／L十二烷基硫酸钠–乙腈(25∶75)为流动相，实际操作时发现，度米芬色谱峰明显拖尾，故在该流动相体系中加入三乙胺作为扫尾剂，当1L水相中含4mL三乙胺时，度米芬的色谱峰无明显拖尾。参考中药化学成分研究中的三元流动相系统，在原有的两元流动相系统中引入甲醇，并调整比例对色谱峰进行优化，十二烷基硫酸钠、乙腈、甲醇的体积比为2∶6∶2时，色谱分离度佳且度米芬色谱峰对称性好。

2.3色谱柱的选择

   分别选择5种不同品牌、型号及柱长的C18色谱柱：InertsilODS–3柱(250mm×4.6mm，5μm)，Phenomenexsynergipolar柱(250mm×4.6mm，5μm)，Kromasil柱(200mm×4.6mm，5μm)，HypersilODS–2柱(250L×4.6mm，5μm)，Shim-PackVP–ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)，在1.3色谱条件下进行比对试验，结果表明，在5种色谱柱中度米芬色谱峰保留时间均稳定，且无杂质干扰，该方法对色谱柱的选择性无特殊要求。由于Shim-PackVP–ODS柱相对其它两种色谱柱性能稳定，耐用、通用性强，故选择Shim-PackVP–ODS柱。

2.4系统适用性试验

   分别精密吸取对照品溶液、样品溶液及阴性空白溶液10μL，依次注入液相色谱仪进行测定，色谱图如图1所示。

   由图1(a)可知，对照品溶液中度米芬色谱峰与其它杂峰完全分离（色谱峰理论塔板数n=13030）；样品溶液中度米芬色谱峰与其它杂峰完全分离，且峰形对称；阴性空白溶液中度米芬色谱峰峰形较好，无干扰峰。

2.5线性关系与检出限

   精密吸取度米芬对照品溶液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置于10mL容量瓶中，用流动相稀释并定容至标线，摇匀，得质量浓度分别为0，86.84，173.68，260.52，374.36，434.20µg／mL的系列标准工作溶液，在1.3色谱条件下分别进样测定。以度米芬的质量浓度(X)为横坐标，相应的色谱峰面积(Y)为纵坐标绘制标准工作曲线，得线性方程为Y=0.0197X+0.0004，线性范围为0～434.20µg／mL，相关系数r=1。以信噪比S／N≥3时对应的度米芬质量浓度确定检出限，得方法检出限为0.13µg／mL。

2.6仪器精密度试验

   精密吸取供试品溶液10μL，连续进样6次，记录色谱峰面积，结果见表1。由表1可知，色谱峰面积测定结果的相对标准偏差为1.17%，表明仪器的精密度良好。

2.7稳定性试验

   精密称取样品5.0g，按1.2方法制备供试品溶液，分别放置0，2，4，6，8，10h后在1.3色谱条件下进样测定，测定结果见表2。

   由表2可知，度米芬色谱峰面积测定结果的相对标准偏差为1.08%，表明供试品溶液在10h内稳定性良好。

2.8方法精密度试验

   精密称取样品5.0g，共6份，按1.2方法制备样品溶液，在1.3色谱条件下分别测定，测定结果见表3。由表3可知，度米芬峰测定结果的相对标准偏差为1.13%，表明该方法的精密度良好。

2.9加标回收试验

   精密称取已知度米芬含量的样品2.5g，分别精密加入相当于含有80%，100%，120%度米芬的对照品溶液适量，按照1.2方法配制样品溶液，在1.3色谱条件下测定，结果见表4。由表4可知，度米芬平均回收率为97.80%，说明所建方法的准确度较高。

2.10实际样品分析

   按照1.2方法制备消毒凝胶剂（3批）、口腔抑菌喷液、妇炎净洗液、足廯净喷雾剂、宝宝肤康凝胶产品的样品溶液，按实验方法进行测定，得度米芬含量测定结果见表5。由表5可知，消毒样品中度米芬测定结果均在标示量范围内。

3结语

   通过不同供试品溶液溶媒、不同色谱柱的比较，系统适应性试验及高效液相色谱法方法学的验证，建立了反相高效液相色谱法测定消毒凝胶中度米芬含量的方法。该方法样品处理简单，灵敏度高，耐用性强，重复性好，通用性强，可广泛用于消毒杀菌产