麻痹性贝类毒素(Paralyticshellfishpoisoningtoxins,PSTs)是生物毒素中危害最大，分布范围最广，事故发生频率最高的一种海洋生物毒素，是由甲藻产生的一类四氢嘌呤类化合物的总称，目前已经分离出20余种。迄今为止，包括中国在已内有20多个国家制定了PSTs相关的限量标准，大多数限量值为80μgSTXeq／(100g)。

   目前国内外报道的PSTs测定方法主要有小鼠生物法、高效液相色谱法、液相色谱–质谱联用法等，其中液相色谱串联质谱法较其它方法优势明显，因而成为检测方法建立的主要研究方向。GB／T5009.213–2008中的小鼠生物法存在灵敏度低、重现性差，无法确定PSTs的种类及各组分的含量等缺点。姜佩宏等用柱后衍生高效液相色谱法检测藤沟藻毒素。YukoCho等利用柱前衍生，实现了对塔玛亚历山大藻单细胞中PSTs的定量分析，基于在碱性条件下PSTs氧化–酸化后可生成荧光物质，进而实现对其监测分析，该法虽解决了国标灵敏度低的问题，但耗时长，且不能对所有毒素组分进行定性定量分析。Carmela等建立了亲水作用液相色谱–电喷雾串联质谱法(HILIC–MS／MS)完成了对主要PSTs的分析；陈桃英等用HPLC–MS法对不同生物不同蓄积部位的麻痹性贝毒进行检测。LC–MS法灵敏度高，可同时定性、定量分析多种毒素成分，在检测分析PSTs方面具有很大的应用潜力。由于麻痹性贝类毒素属极性较大化合物，色谱保留行为差，基质中亲水杂质难以去除，从而导致基质干扰强，检测灵敏度低，峰型差等问题。笔者对该法的色谱条件进行了优化，选用对极性物质有一定吸附能力的石墨化炭黑固相萃取小柱，小剂量上样以达到对PSTs的吸附，进而对其进行净化，减小基质效应，提高灵敏度的同时获得了理想的回收率和精密度，提高了我国水产品进入国际市场时，用液相色谱–串联质谱法检测麻痹性贝类毒素的灵敏度和准确性。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

   超高效液相色谱–串联质谱仪：[**]cquityXevoTQ型，美国Waters公司；

   高速冷冻离心机：ThermoST16R型，美国赛默飞世尔科技公司；

   氮吹仪：TurboVapLV型，美国CaliperlifeSciences公司；

   固相萃取仪：VacElutSPS24型，美国安捷伦科技有限公司；

   漩涡混合器：Vortex–genie2型，美国Scientificindustries公司；

   ENVI–Carb固相萃取柱：美国supelco公司；脱氧藤沟藻毒素2,3(dcGTX2,3)、藤沟藻毒

   素2,3(GTX2,3)、藤沟藻毒素1,4(GTX1,4)、藤沟藻毒素5(GTX5)、新石房蛤毒素(neoSTX)、石房蛤毒素(STX)、脱氧甲酰基类毒素(dcSTX)标准物质：Canada公司；

   乙腈、甲酸：色谱纯，美国Fisher公司；

   甲酸铵、氨水：优级纯，北京化工厂；

   实验用水为超纯水。

1.2实验方法

1.2.1溶液配制

   混合标准储备溶液：分别准确吸取10种麻痹性贝类毒素标准物质,以甲醇溶解配制成混合标准储备液，于4℃保存，质量浓度见表1。

1.2.2基质工作曲线配制

   准确吸取混合标准储备液20～100μL，用空白基质液定容至1mL，得到系列基质标准工作溶液，于–20℃避光保存，配制情况见表2。

1.3仪器工作条件

1.3.1色谱条件

   色谱柱：TSK–Gel[**]mide–80柱(2.0mm×150mm，5μm)；柱温：40℃；样品室温度：4℃；流动相：[**]相为水溶液(含2mmol／L甲酸铵，50mmol／L甲酸)，B相为95%乙腈水溶液(含2mmol／L甲酸铵，50mmol／L甲酸)，梯度洗脱条件见表3；流量：0.4mL／min；进样体积：10μL。

1.3.2串联质谱条件

   电喷雾离子源，正负离子切换扫描模式；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；锥孔反吹气：氮气，流量为50L／h；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气：氮气，流量为650L／h；多反应监测(MRM)模式采集。10种麻痹性贝类毒素质谱参数列于表4 

1.4样品前处理

   样品制备：用清水将贝壳洗净，撬开贝壳，切断闭壳肌，用水淋洗，去除泥沙及异物，仔细取出贝肉，切勿割破贝体，在筛子上平铺沥水5min，然后将贝肉均质，混匀，–18℃避光保存。对扇贝样品取可食部分进行检测，严禁加热或用麻醉剂开壳。

   提取：称取5g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，加入5mL1%乙酸水溶液，涡旋90s，将离心管密封置于102℃烘箱，10min后取出，流水冷却至室温，以4500r／min离心10min，待净化。

   净化：移取上清液1mL于2mL离心管中，加入5μL氨水，涡旋混匀。取250μL提取液，上样到用3mL20%乙腈水溶液(含0.8%乙酸)、3mL0.1%氨水溶液活化后的supelcoENVI–Carb固相萃取柱，待流干后以700μL超纯水淋洗，正压挤干，弃去所有流出液，最后以2mL20%乙腈水溶液(含0.8%乙酸)洗脱，正压挤干，将洗脱液全部收集于5mL离心管中，混匀，过0.22μm滤膜后待测。