栎扁枝衣又名橡苔(Everniaprunastri或oakmoss)是一种常寄生于北半球多山地区橡树、杉树、松树树干和树枝的地衣。树苔是一种常寄生于桦叔、松树和杉树枝的地衣。橡苔提取物和树苔提取物因为清香独特，香气浓郁多韵，是日化、香烟香精调配的独特原料。每年都有许多的橡苔提取物和树苔提取物被用于法国的香水工业。橡苔提取物和树苔提取物因为存在一定的致敏性，欧洲消费者安全科学委员会(SCCP)在2012年发布的《OpiniononFragranceallergensincosmeticproducts》认为其在淋洗类化妆品中含量达到0.01%时需标示，在驻留类化妆品中含量超过0.001%时需标示。GB／T22731–2017《日用香精》也对其在产品中的使用作了限制。由于橡苔提取物和树苔提取物成分复杂，各成分含量在不同来源的产品中不尽相同，目前化妆品中橡苔提取物和树苔提取物含量的检测还没有检验方法。

   β-苔黑酚酸甲酯（分子式为C10H14O4）是橡苔和树苔的一种特征成分，其化学结构见图1。文献报道其在橡苔提取物中的含量在1.23%~17.3%之间，在树苔提取物中的含量在2.14%~47.7%之间。因此β-苔黑酚酸甲酯含量可作为化妆品是否为橡苔提取物和树苔提取物阴性样品的评判指标。当化妆品中β-苔黑酚酸甲酯未检出时，可认为化妆品中不含有橡苔提取物和树苔提取物。目前关于β-苔黑酚酸甲酯的检测方法主要是气相色谱–质谱法，检测的样品主要是香精、精油和烟丝。刘思然等建立了香精中β-苔黑酚酸甲酯的气相色谱–质谱检测方法，方法线性范围为5～100mg／L；王凯等建立了精油中β-苔黑酚酸甲酯的气相色谱–飞行时间质谱检测方法；黄延俊等建立了细支卷烟中β-苔黑酚酸甲酯的气相色谱–质谱检测方法。关于化妆品中β-苔黑酚酸甲酯的检测方法鲜见报道。笔者研究采用液相色谱–串联质谱法检测化妆品中的β-苔黑酚酸甲酯，方法检测灵敏度高，对化妆品中橡苔提取物和树苔提取物阴性筛查具有重要意义。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

   液相色谱–串联质谱仪：Ultimate3000–TSQQuantiva型，美国赛默飞世尔公司；

   涡旋混合仪：MinishakerMS3digital型，德国IK[**]公司；

   超声波清洗仪：SK8200H型，北京盈祥科技有限公司；

   氮吹浓缩仪器：EF[**][**]–DC24–RT型，北京盈祥科技有限公司；

   离心机：MiniSpin型，德国Eppendorf公司；

   天平：BS[**]224S型，分度值为0.1mg，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；

   超纯水仪：Mill-Q型，美国Merckmillipore公司；

   OasisW[**]X小柱：60mg，150mg，美国Waters公司，使用前用6mL酸化甲醇活化；

   β-苔黑酚酸甲酯标准样品：编号为C[**]S4707–47–5，纯度为98%，北京盈祥科技有限公司；

   乙腈、甲醇：色谱纯，美国Fisher公司；

   甲酸：色谱纯，美国Sigma-[**]ldrich公司；

   实验用水为三级水。

1.2溶液配制

   β-苔黑酚酸甲酯标准储备溶液：1.0mg／mL，称取0.01gβ-苔黑酚酸甲酯标准样品于10mL容量瓶中，用甲醇定容到标线，摇匀，于–20℃存放。

   β-苔黑酚酸甲酯标准中间液Ⅰ：10mg／L，移取1mLβ-苔黑酚酸甲酯标准储备液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到标线，摇匀。

   β-苔黑酚酸甲酯标准中间液Ⅱ：100µg／L，移取1mLβ-苔黑酚酸甲酯标准中间液Ⅰ于100mL容量瓶中，用甲醇定容到标线，摇匀，使用前配制。

   β-苔黑酚酸甲酯标准工作溶液：分别移取一定体积的β-苔黑酚酸甲酯标准中间液Ⅱ于数支10mL比色管中，用甲醇定容到标线，摇匀，配制成质量浓度分别为0，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0mg／L的系列标准工作溶液，使用前配制。

   酸化甲醇溶液：移取10mL甲酸溶液到1L容量瓶中，用甲醇定容至标线。

1.3仪器工作条件

1.3.1液相色谱仪

   色谱柱：[**]gilentPoroshell120EC–C18柱(100mm×4.6mm，4μm，美国安捷伦科技有限公司)；柱温：30℃；进样体积：10μL；流动相：水–乙腈，梯度洗脱，流量为0.8mL／min；梯度洗脱程序如表1所示。

1.3.2质谱仪

   ESI离子源，负离子模式；喷雾电压：1500V；鞘气压力：275.8kPa；辅助气压力：34.5kPa；离子源温度：300℃，传输管温度325℃；反应监测(SRM)；监测离子对：m／z195／163，碰撞能为10V，m／z195／119，碰撞能为20V；循环时间：1.0s。

1.4样品前处理

   水剂、油脂、膏霜样品：称取0.5g样品于10mL比色管中，用甲醇定容至标线，涡旋混匀，于25℃下超声萃取10min。取出后再次涡旋混匀，取1mL溶液过0.22µm滤膜后上机测试。

   乳液样品：称取0.5g样品于10mL比色管中，用酸化甲醇定容到标线，涡旋混匀，25℃下超声萃取10min。取出后再次涡旋混匀，取2mL溶液，以转速10000r／min离心5min，移取1mL上清液于60mgW[**]X小柱上，用氮吹试管接收流出液，再用2mL酸化甲醇分两次洗脱小柱，完全接收流出液。将洗脱液在40℃下氮吹至干，重新加入1mL甲醇溶解残渣，溶液过0.22µm滤膜后上机测试。

   香波样品：小柱使用150mg规格的W[**]X柱，其余前处理过程及参数与乳液样品相同。

1.5基质效应计算

   用空白基质溶液配制1µg／L的基质标准溶液，根据测定得到的浓度计算样品基质效应。

式中：M_E——基质效应；

   c₁——根据工作曲线计算得到的基质标准溶液质量浓度，µg／L；

   c₂——基质溶液理论质量浓度，µg／L。

1.6结果计算

   样品中β-苔黑酚酸甲酯含量按式(2)计算。

   其中：w——β-苔黑酚酸甲酯含量，%；

   c——由工作曲线计算得到的样品溶液质量浓度，µg／L；

   V——定容体积，mL；

   ƒ——稀释倍数；

   m——称样量，g。